بررسی میزان بیان ژن های babA وsabA در هلیکوباکترپیلوری در بیماران مبتلا به زخم معده ، زخم دوازدهه وسرطان معده.

Expression assessment of the H.pylori babA and sabA genes in patients with peptic ulcer, duodenal ulcer and gastric cancer


چاپ صفحه
پژوهان
صفحه نخست سامانه
مجری و همکاران
مجری و همکاران
دانلود
دانلود
علوم پزشکی بابل
علوم پزشکی بابل

اطلاعات کلی طرح
hide/show

کد رهگیری طرح 9440842
کد مصوب طرح 9440842
کد طرح در واحد ارائه دهنده 2991
شماره ثبت در دبیرخانه 6277
عنوان فارسی طرح بررسی میزان بیان ژن های babA وsabA در هلیکوباکترپیلوری در بیماران مبتلا به زخم معده ، زخم دوازدهه وسرطان معده.
عنوان لاتین طرح Expression assessment of the H.pylori babA and sabA genes in patients with peptic ulcer, duodenal ulcer and gastric cancer
محل اجرای طرح دانشکده پزشکی
رسته مطالعاتی مورد شاهدی
سازمان مجری
تاریخ ارائه طرح 1394/06/01
تاریخ تصویب 1394/07/21
تاریخ شروع 1394/07/21
تاریخ خاتمه 1395/04/21
تاریخ خاتمه مصوب شورا 1401/02/06
وضعیت گردش کار خاتمه یافته

اطلاعات مجری و همکاران
hide/show

نام و نام‌خانوادگی سمت در طرح نوع همکاری درجه‌تحصیلی پست الکترونیک
مریم صالحیمجریمجری اولکارشناس ارشدmaryamsalehi666@gmail.com
مهدی رجب نیامجری مسئولاجراء طرحدکتری تخصصیramazan@yahoo.com
فرزین صادقیمجریمجری سومدکتری تخصصیsadeghifarzin6@gmail.com
جواد شکری شیروانیمجریاستاد مشاوردکتری فوق تخصص بالینیjavadshokry@gmail.com
ثریا خفریهمکار اصلیاستاد مشاوردکتری تخصصیkhafri@yahoo.com
الهه فردوسی شاهاندشتیمجریاستاد مشاوردکتری تخصصیelaheh.ferdosi@yahoo.com
سید امیر محمد رضائی مجدهمکار اصلیهمکاری در اجرای طرحدکتری حرفه ایamirmohamadmajd@gmail.com

فهرست کلی فصول هدف از اجراهدف کلی طرح: بررسی میزان بیان ژن های babA و sabA درهلیکوباکتر پیلوری وارتباط آن با زخم معده ، زخم دوازدهه و سرطان معده. فرضیاتاهداف و فرضیات: # نوع هدف یافرضیه عنوان هدف یافرضیه 1 هدف اصلی ارتباط بیان ژن SabA بازخم معده ، زخم دئودنال و سرطان 2 هدف اصلی ارتباط بیان ژن babA با زخم معده ، زخم دئودنال و سرطان 3 هدف فرعی میزان بیان ژن SabA در انواع بیماریهای گاسترودئودنال 4 هدف فرعی میزان بیان ژن babA در انواع بیماریهای گاسترودئودنال 5 سوال آیا بیان ژن SabA بازخم معده ، زخم دئودنال و سرطان در این منطقه ارتباط معناداری دارد؟ 6 سوال آیا بیان ژن babA با زخم معده ، زخم دئودنال و سرطان در این منطقه ارتباط معناداری دارد؟ 7 فرضیه بیان ژن babA با زخم معده ، زخم دئودنال و سرطان ارتباط معناداری دارد. 8 فرضیه بیان ژن SabA بازخم معده ، زخم دئودنال و سرطان ارتباط معناداری دارد. چه موسساتی می توانند از نتایج طرح استفاده نمایند ؟ در صورت ساخت دستگاه نظر صنعت و داوران کلمات کلیدی روش پژوهش وتکنیکهای اجراییخلاصه روش اجرا طرح: 1- نمونه های بیوپسی با روش آندوسکوپی توسط پزشک متخصص از بیماران دچار عوارض گوارشی تهیه می شود. 2- سپس نمونه های بیوپسی به داخل ظروف شیشه ای حاوی سرم فیزیولوژی استریل منتقل می شود و حداکثر 3 ساعت پس از نمونه گیری جهت انجام آزمایشات میکروبیولوژیک و کشت به آزمایشگاه میکروبیولوژی گروه میکروب شناسی دانشکده ی پزشکی ارسال خواهد شد. 3- نمونه ها برروی محیط های اختصاصی و تحت شرایط میکروآئروفیلیک جهت رشد هلیکوباکترپیلوری کشت داده خواهند شد. 4- پس از کشت باکتری ، سایر آزمایشات بیوشیمیایی از جمله تست های کاتالاز ، اکسیداز و اوره آز بر روی کلنی های مشکوک به هلیکوباکتر پیلوری در جهت تایید انجام خواهد شد. 5- سپس کلنی های هر باکتری جمع آوری خواهد شد و در80- نگهداری می شود. 6- 90 نمونه هلیکوباکترپیلوری به عنوان گروه مورد (30 نمونه جدا شده از زخم معده ، 30 نمونه جدا شده از زخم دوازدهه و30 نمونه جدا شده از سرطان معده ) و30 نمونه هلیکوباکترپیلوری جدا شده از گاستریت به عنوان گروه شاهد مورد مطالعه قرار می گیرند. 7- از هر یک از کلنی های H.pylori محتوای RNA با استفاده از کیت استخراج RNA ، استخراج می شود. 8- در مرحله ی بعد محتویات حاصل از استخراج RNA توسط کیت سنتز cDNA به DNA مکمل سنتز می شود. 9- سپس DNA مکمل با روش SYBR-green Real Time RT-PCR با استفاده از Super SYBR Green qPCR Master Mix 2X در دستگاه Real Time مورد بررسی قرار می گیرد. اساس این روش تعیین کمی میزان بیان هر یک از ژن های sabA و babA نسبت به ژن خانه دار 16 S rRNA ازهلیکوباکترپیلوری می باشد. 10- سپس نتایج حاصل از هر ژن در نرم افزار SPSS وارد می شود و با توجه به نوع اختلالات در دو گروه مورد و شاهد با آزمون کای اسکوئر آنالیز های لازم انجام می شود. دلایل ضرورت و توجیه انجام کار تعریف مسالهمقدمه و بیان مساله: هلیکوباکترپیلوری باکتری خمیده ای شکل گرم منفی است که اولین بار درسال 1982 جداسازی شد.این باکتری مهمترین علت بیماریهای معده ای _روده ای از جمله گاستریت ,زخم اثنی عشر وسرطان معده است(1, 2).درسال 1994 میلادی به عنوان کارسینوژن کلاس یک شناسایی شد و اکنون به عنوان رایج ترین عامل سرطان های مرتبط با عفونت در نژاد های مختلف محسوب میشود که 55درصد سرطان جهانی را تشکیل می دهد (3, 4).هلیکوباکتر پیلوری نزدیک به نیمی از مردم جهان را آلوده کرده واساساٌ باعث ایجاد گاستریت غیرآتروفیک مزمن در همه ی افراد مبتلا میشود و پس از چند دهه التهاب ،عفونت ممکن است منجر به بیماری زخم پپتیک (حدود10 الی 15 درصد) و در مواردی به سرطان معده(حدود1 الی 3 درصد)توسعه یابد (5, 6). نتیجه ی ابتلا به عفونت هلیکوباکترپیلوری درساده ترین شکل گاستریت غیرآتروفیک است که معمولا بدون علامت است و درمواردپیچیده تر منجر به زخم معده و سرطان معده میشود که عواملی چون میزبان ،محیط زیست و عوامل باکتریایی درایجاد آن دخیل اند.(7).هلیکو باکترپیلوری در مخاط معده انسان مستقر می شود و عامل ورم مزمن معده و یک فاکتور خطر برای توسعه ی زخم معده و سرطان معده است(8).مطالعات متعددی نشان داده است که فاکتورهای مختلف مربوط به میزبان وباکتری دربروز عوامل پاتولوژیک وکیلینیکی دخیل هستند, درمیان عوامل باکتریایی توانایی باکتری در اتصال به سلولهای پوششی برای شروع پاسخ های التهابی معده بسیارحیاتی است(9-11).یکی از مهمترین مولکولهای چسبان (Adhesin) در هلیکوباکترپیلوری پروتئین HopS یا Blood group antigen binding Adhesin) babA) است که توسط ژن babA2 رمزدهی میشود و 78کیلو دالتون وزن دارد. تحقیقات متعددی نشان داده است که این مولکول چسبان مسئول اتصال هلیکوباکترپیلوری به آنتی ژنهای گروه خونی لوئیس b است. این آنتی ژنهای فوکوزیله شده روی سطح سلولهای پوششی معده قرار دارند. پروتئین BabA یکی از مهمترین پروتئین های غشای خارجی هلیکوباکترپیلوری است. توانایی اتصال این باکتری به گروه خونی لوئیس b استقرار باکتری را درمعده تسهیل میکند وممکن است مستقیما دربیماریزایی نقش داشته باشد(12, 13). BabA2 بافعالیت التهاب و التهاب مزمن مخاط معده در ارتباط است و باعث بدتر شدن التهاب مخاط معده می شود(14). ادهزین متصل شونده به اسید سیالیک (HopP) یا sialic acid-binding adhesin) sabA) یکی از ادهزین های مهم هلیکوباکترپیلوری است که در شروع کلونیزاسیون این باکتری در مخاط معده نقش حیاتی دارد.گیرنده ی این ادهزین برروی سلولهای اپیتلیال(Sialyl-sLex and sLea( lewis x/a antigens می باشد (15) . گرانولوسیت های انسان دارای کربوهیدرات سیالیلات درسطح خود میباشند که بطور اختصاصی توسط SabA شناسایی می شوند ومیتوانند فعالیت نوتروفیل هارا تحت الشعاع قرار دهند به همین علت این احتمال وجود دارد که SabA در ایجادالتهاب و آتروفی نقش داشته باشد (16, 17). مطالعات اخیر در جوامع اروپایی نشان داده است که SabA ممکن است با افزایش پاتوژنیسیته ی هلیکو باکترپیلوری در اپیتلیوم معده ارتباط داشته باشد(16, 18) . فهرست منابع و مراجع علمی داخلی فهرست منابع و مراجع علمی خارجیمنابع و ماخذ: # عنوان منبع و ماخذ 1 Oliveira AG, Santos A, Guerra JB, Rocha GA, Rocha AM, Oliveira CA, et al. babA2- and cagA-positive Helicobacter pylori strains are associated with duodenal ulcer and gastric carcinoma in Brazil. Journal of clinical microbiology. 2003;41(8):3964-6. 2 2. NIH Consensus Conference. Helicobacter pylori in peptic ulcer disease. NIH Consensus Development Panel on Helicobacter pylori in Peptic Ulcer Disease. Jama. 1994;272(1):65-9. 3 3. Schistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori. IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. Lyon, 7-14 June 1994. IARC monographs on the evaluation of carcinogenic risks to humans / World Health Organization, International Agency for Research on Cancer. 1994;61:1-241. 4 Parkin DM, Bray F, Ferlay J, Pisani P. Global cancer statistics, 2002. CA Cancer J Clin. 2005;55(2):74-108. 5 Hansson LE, Nyren O, Hsing AW, Bergstrom R, Josefsson S, Chow WH, et al. The risk of stomach cancer in patients with gastric or duodenal ulcer disease. N Engl J Med. 1996;335(4):242-9. 6 Peek RM, Jr., Crabtree JE. Helicobacter infection and gastric neoplasia. J Pathol. 2006;208(2):233-48. 7 Aviles-Jimenez F, Reyes-Leon A, Nieto-Patlan E, Hansen LM, Burgueno J, Ramos IP, et al. In vivo expression of Helicobacter pylori virulence genes in patients with gastritis, ulcer, and gastric cancer. Infect Immun. 2012;80(2):594-601. 8 Vinagre RM, Vilar-e-Silva A, Fecury AA, Martins LC. Role of Helicobacter pylori infection and lifestyle habits in the development of gastroduodenal diseases in a population from the Brazilian Amazon. Arquivos de gastroenterologia. 2013;50(3):170-4. 9 Olfat FO, Zheng Q, Oleastro M, Voland P, Boren T, Karttunen R, et al. Correlation of the Helicobacter pylori adherence factor BabA with duodenal ulcer disease in four European countries. FEMS immunology and medical microbiology. 2005;44(2):151-6. 10 Gerhard M, Lehn N, Neumayer N, Boren T, Rad R, Schepp W, et al. Clinical relevance of the Helicobacter pylori gene for blood-group antigen-binding adhesin. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1999;96(22):12778-83. 11 Hessey SJ, Spencer J, Wyatt JI, Sobala G, Rathbone BJ, Axon AT, et al. Bacterial adhesion and disease activity in Helicobacter associated chronic gastritis. Gut. 1990;31(2):134-8. 12 Ilver D, Arnqvist A, Ogren J, Frick IM, Kersulyte D, Incecik ET, et al. Helicobacter pylori adhesin binding fucosylated histo-blood group antigens revealed by retagging. Science. 1998;279(5349):373-7. 13 Nista EC, Candelli M, Cremonini F, Cazzato IA, Zocco MA, Franceschi F, et al. Bacillus clausii therapy to reduce side-effects of anti-Helicobacter pylori treatment: randomized, double-blind, placebo controlled trial. Alimentary pharmacology & therapeutics. 2004;20(10):1181-8. 14 Homan M, Sterbenc A, Kocjan BJ, Luzar B, Zidar N, Orel R, et al. Prevalence of the Helicobacter pylori babA2 gene and correlation with the degree of gastritis in infected Slovenian children. Antonie van Leeuwenhoek. 2014;106(4):637-45. 15 Aspholm M, Olfat FO, Norden J, Sonden B, Lundberg C, Sjostrom R, et al. SabA is the H. pylori hemagglutinin and is polymorphic in binding to sialylated glycans. PLoS pathogens. 2006;2(10):e110. 16 Mahdavi J, Sonden B, Hurtig M, Olfat FO, Forsberg L, Roche N, et al. Helicobacter pylori SabA adhesin in persistent infection and chronic inflammation. Science. 2002;297(5581):573-8. 17 Unemo M, Aspholm-Hurtig M, Ilver D, Bergstrom J, Boren T, Danielsson D, et al. The sialic acid binding SabA adhesin of Helicobacter pylori is essential for nonopsonic activation of human neutrophils. The Journal of biological chemistry. 2005;280(15):15390-7. 18 Yamaoka Y. Increasing evidence of the role of Helicobacter pylori SabA in the pathogenesis of gastroduodenal disease. Journal of infection in developing countries. 2008;2(3):174-81. 19 Talebi Bezmin Abadi A, Taghvaei T, Mohabbati Mobarez A, Vaira G, Vaira D. High correlation of babA 2-positive strains of Helicobacter pylori with the presence of gastric cancer. Intern Emerg Med. 2013;8(6):497-501. 20 20. Eshaghi M. M, Ghasemian Safaei H. , PhD2 , Havaei AA. , PhD2 , Navabakbar F. , PhD2 , Salehi R. , PhD3 , Tavakoli H. , MD4 , Hasanzadeh A. , MSc Assessment of babA2 genotype frequency in H. Pylori and its relationship with digestive tract diseases in patients in Isfahan’s Alzahra Hospital. Scientific Journal of Kurdistan University of Medical Sciences, 2008(Issue 3). 2008. 21 Lai CH, Kuo CH, Chen YC, Chao FY, Poon SK, Chang CS, et al. High prevalence of cagA- and babA2-positive Helicobacter pylori clinical isolates in Taiwan. Journal of clinical microbiology. 2002;40(10):3860-2. 22 Han YH, Liu WZ, Zhu HY, Xiao SD. Clinical relevance of iceA and babA2 genotypes of Helicobacter pylori in a Shanghai population. Chinese journal of digestive diseases. 2004;5(4):181-5. 23 Yu J, Leung WK, Go MY, Chan MC, To KF, Ng EK, et al. Relationship between Helicobacter pylori babA2 status with gastric epithelial cell turnover and premalignant gastric lesions. Gut. 2002;51(4):480-4. 24 Yamaoka Y, Ojo O, Fujimoto S, Odenbreit S, Haas R, Gutierrez O, et al. Helicobacter pylori outer membrane proteins and gastroduodenal disease. Gut. 2006;55(6):775-81. 25 Zhang J, Dou C, Song Y, Ji C, Gu S, Xie Y, et al. Polymorphisms of tumor necrosis factor-alpha are associated with increased susceptibility to gastric cancer: a meta-analysis. J Hum Genet. 2008;53(6):479-89. 26 Sheu BS, Odenbreit S, Hung KH, Liu CP, Sheu SM, Yang HB, et al. Interaction between host gastric Sialyl-Lewis X and H. pylori SabA enhances H. pylori density in patients lacking gastric Lewis B antigen. Am J Gastroenterol. 2006;101(1):36-44. خلاصه نتیجه اجرای طرح سابقه علمی طرح و پژوهشهای انجام شده با ذکر مأخذ به ویژه در ایران خلاصه طرح طبق اهداف پیش بینی شده WhatRequirementsAreMet ملاحظات گروه ملاحظات ناظر HomeAddress WorkPlace aAbstract مهمانان جلسه دستور جلسه آینده دستور جلسه چکیده پایان نامه خلاصه

-->

پیوست ها
hide/show

نام فایل تاریخ درج فایل اندازه فایل دانلود
2991.htm1394/08/06157617دانلود