بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاطتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین در موش صحرایی.

.Evaluation of histopathological and epigenetic protective effects of disulfiram on prevention of Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats

---

---

GTGTTAACGCGTTGCGTATC(26

M2  (RASSF1A)--->AACCCCGCGAACTAAAAACGA(26

U1  (RASSF1A)--->TTTGGTTGGAGTGTGTTAATGTG(26

 U2  (RASSF1A)--->CAAACCCCACAAACTAAAAACAA(26

 

تکنیک  : Real time این روش جهت بررسی میزان  تغییرات بیان ژن  RASSF1Aدر ریه رت های نژاد ویستار به وزن 230_+20 گرم، بعد تیمار با داروی دیسولفیرام مورد استفاده قرار خواهد گرفت.

استخراج  RNA  تا حد امکان در شرایط استریل عاری از آنزیم RNase در زیر هود با استفاده از دستکش و ماسک انجام خواهد شد، به این تر تیب که میکروتیوبها و سر سمپلرها از نوع  free Rnase انتخاب شده و قبل از پروسه استخراج  RNA به مدت 15 دقیقه اشعه UV  هود روشن و سپس با استفاده از پنبه آغشته به کلروفورم عاری از آنزیم RNase خواهد شد. استخراج RNA طبق پروتوکل کیت total RNA extraction mini kit YT9065 شرکت یکتا تجهیز آزما انجام خواهد شد.

تعیین کیفیت و کمیت RNA  استخراج شده توسط دستگاه اسپکتروفتومتری انجام خواهد شد؛ میزان جذب نور((ODدر طول موج 260 نانومتر بیانگر میزان غلظت RNA می باشد که با واحد μg/ml نشان داده می شود. همچنین نسبت میزان جذب نور در طول موج 280/260 نانومتر نشان دهنده کیفیت RNA استخراج شده خواهد بود. در ادامه مرحله قبل، با توجه به میزانOD بدست آمده،  RNA  به میزان لازم در داخل میکرو تیوپ  0.2 RNase free ریخته شده و حجم کلی نمونه با اضافه آب فاقد RNase به حجم 11 میکرولیتر رسیده و مراحل طبق پروتکل کیت ساخت cDNA انجام خواهد شد.

تهیه CDNA : تهیه CDNA  طبق پروتکل کیت CDNA synthesis kit YT14500 از شرکت یکتا تجهیز آزما انجام می شود.

مرحله   Real time RT PCR

اندازه گیری میزان بیان ژن های مورد نظر با استفاده از پرایمر ACTβ به عنوان Endogenous control و پرایمر RASSF1A  با استفاده از کیت SYBR green q PCR master mix 2×1ml YT2551  شرکت یکتا تجهیز آزما با روش Ct) ΔΔComparative Ct ( انجام شد.

برنامه Real time PCR  شامل مراحل زیر است :

1)first denaturation در دمای Cº95 به مدت 10دقیقه.

2) شامل مراحل (Denaturation ، Annealing و Extension) به ترتیب به تعداد 40 سیکل تکرار.

3)مرحله پایانی منحنی ذوب، توسط دستگاه رسم خواهد شد.

تمام آزمایشات Real time RT PCR سه بار تکرار خواهدشد و میانگین CT (سیکل آستانه) آنها پس از کامل شدن واکنش توسط دستگاه  محاسبه گردیده و میزان بیان ژنها طبق فرمول زیر محاسبه می شود:

ΔCT= CT target gene –CT reference gene

=ΔCT treated – ΔCT untreated CT ΔΔ

میزان بیان نسبی هر ژن برابر با ^{ΔΔ CT-}2 در نظر گرفته خواهد شد ]21و20[ .

 

Primer ID	Sequences (5' -> 3')	Reference
*RASSF1A-F	TCATCTGGGGCGTCGTG	23و22
*RASSF1A-R	CGTTCGTGTCCCGCTCC	23و22
*ACTβ-F	GTTGTCGACGACGAGCG	23و22
*ACTβ-R	GCACAGAGCCTCGCCTT	23و22

  مشکلات اجرائی احتمالی هدف اصلی

بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی القا شده توسط بلئومایسین در موش صحرایی.

هدف فرعی

1-بررسی هیستوپاتولوژیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین در موش صحرایی(مانند بررسی احتقان و خونریزی داخل آلوئول ها،التهاب،پارگی و کلاپس کیسه های هوایی).

2-بررسی اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین از طریق دمتیله کردن ژن RASSF1A

هدف کاربردی

اگر دیسولفیرام بتواند از طریق روند اپی ژنتیک، باعث افزایش بیان RASSF1A و جلوگیری از افزایش بیش از حد کلاژن در موش هایی که بلئومایسین دریافت کرده اند شود، می توان نتیجه گیری نمود که دیسولفیرام، به عنوان کاهنده ی عارضه ی جانبی اثر فیبروز ریوی ناشی از بلئومایسین موثر است.

فرضیه

1	فرضیه	داروی دیسولفیرام می‌تواند از طریق روند اپی ژنتیک و دمتیله کردن ژن RASSF1A، منجر به افزایش بیان ژن RASSF1A شود.
2	فرضیه	داروی دیسولفیرام می‌تواند از پیشروی علائم هیستوپاتولوژیکی فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین مانند احتقان و خونریزی داخل آلوئول ها،التهاب،پاره شدن و کلاپس کیسه های هوایی جلوگیری کند

سوال خلاصه روش اجرا ابزارها روش تجزیه تحلیل آماری طرح مساله پرسش آغازین پیشینه تحقیق ضرورت و اهمیت برای صدا و سیما مبانی نظری تحقیق هدف تحقیق سوال های تحقیق فرضیه تحقیق کلمات کلیدی چکیده متن مقاله نتیجه مقاله AcAbstract پیشینه طرحمساله تحقیق: بلئومایسین یک داروی شیمی ­درمانی است که برای درمان طیف وسیعی از سرطان­های انسانی موثر می­ باشد. این دارو، حداقل اثر سمی را بر بافت­های خون­ساز سیستم ایمنی دارد و می ­تواند بطور گسترده ­ای همراه با سایر عوامل شیمی ­درمانی بکار رود ولی متاسفانه به دلیل بروز عارضه فیبروز ریوی، کاربرد این دارو از نظر بالینی بسیار محدود شده است. فیبروز ریوی که با تغییرات اپی ژنتیک همراه می­ باشد، بیماری مزمن و کشنده است که با تکثیر بیش از حد فیبروبلاست و رسوب پروتئین­های ماتریکس خارج سلولی مانند فیبرونکتین و کلاژن مشخص می­ شود، در نتیجه ساختار و عملکرد طبیعی بافت ریه را تغییر می­دهد.دیسولفیرام با القای تغییرات اپی ­ژنتیک، ممکن است بتواند، عارضه فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین را متوقف کند. هدف این پژوهش بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین در موش صحرایی می ­باشد.فهرست کلی فصول هدف از اجراهدف کلی طرح: بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی القا شده توسط بلئومایسین در موش صحرایی­.فرضیاتاهداف و فرضیات: # نوع هدف یافرضیه عنوان هدف یافرضیه 1 هدف اصلی بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی القا شده توسط بلئومایسین در موش صحرایی. 2 فرضیه داروی دیسولفیرام می‌تواند از طریق روند اپی ژنتیک و دمتیله کردن ژن RASSF1A، منجر به افزایش بیان ژن RASSF1A شود. 3 فرضیه داروی دیسولفیرام می‌تواند از پیشروی علائم هیستوپاتولوژیکی فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین مانند احتقان و خونریزی داخل آلوئول ها،التهاب،پاره شدن و کلاپس کیسه های هوایی جلوگیری کند 4 هدف فرعی 1-بررسی هیستوپاتولوژیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین در موش صحرایی(مانند بررسی احتقان و خونریزی داخل آلوئول ها،التهاب،پارگی و کلاپس کیسه های هوایی). 2-بررسی اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین از طریق دمتیله کردن ژن RASSF1A 5 هدف کاربردی اگر دیسولفیرام بتواند از طریق روند اپی ژنتیک، باعث افزایش بیان RASSF1A و جلوگیری از افزایش بیش از حد کلاژن در موش هایی که بلئومایسین دریافت کرده اند شود، می توان نتیجه گیری نمود که دیسولفیرام، به عنوان کاهنده ی عارضه ی جانبی اثر فیبروز ریوی ناشی از بلئومایسین موثر است. چه موسساتی می توانند از نتایج طرح استفاده نمایند ؟ در صورت ساخت دستگاه نظر صنعت و داوران کلمات کلیدی روش پژوهش وتکنیکهای اجراییخلاصه روش اجرا طرح: نحوه تزریق دیسولفیرام: این پژوهش روی 30 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار به وزن 230_+20 گرم که بطور ­تصادفی به 6 گروه 5تایی تقسیم می ­شوند، انجام می­ شود.دو روز قبل از تجویز بلئومایسین، 3 گروه دیسولفیرام را در دوزهای 1و10و100 mg/kgبه صورت پیش ­درمانی و تزریق داخل صفاقی دریافت کرده و یک گروه کنترل و یک گروه شم در نظر گرفته می شود و یک گروه روغن کنجد دریافت می­ کنند[24,25,26,27,28] نحوه ایجاد فیبروز ریوی: به موش ­ها بلئومایسین سولفات از طریق نای مستقیما به درون ریه، تزریق می ­شود .برای ایجاد فیبروز ریوی به 3 گروه تست و گروه شم و گروهی که روغن کنجد دریافت کرده­ اند،5mg/kgb.w بلئومایسین تزریق می ­شود. موش ها را با کتامین-زایلیزین بی هوش کرده و با عمل جراحی نای آنها را باز می­ کنیم و یک تراشه برای تزریق بلئومایسین در نای قرار داده تا بلئومایسین بطور مستقیم در ریه چکانده شود و در یک گروه دیگر به عنوان نمونه کنترل ، فیبروز ایجاد نمی­ شود. پس از تزریق بلئومایسین، منطقه جراحی را با نخ بخیه 3صفر بخیه زده و موش ها به مدت دو هفته هر روز و با دوزهای قبلی دیسولفیرام دریافت می­کنند. بررسی اثرات هیستوپاتولوژیکی بافت ریه از طریق تهیه لام: پس از کشتن موش های صحرایی با دوز بالای کتامین، ریه راست یا چپ را بطور تصادفی برای تهیه لام و بررسی اپی ژنتیکی انتخاب کرده و جدا می گردند. یکی از دو ریه راست یا چپ بلافاصله پس از جدا شدن وارد فرمالین شده و پس از یک هفته مراحل آماده سازی بافتی طی می شود و برش های سریالی 5 میکرونی تهیه می کنیم و سپس جهت مشاهده رشته های کلاژن از رنگ آمیزی تری کروم ماسون و نیز از رنگ آمیزی H&E برای بررسی میزان التهاب بافتی استفاده می کنیم. روش Methyl PCR :این روش جهت بررسی میزان متیلاسیون و تغییرات آن بعد از تجویز داروی دیسولفیرام به موش ها صورت می ­گیرد. برای استخراج DNA از نمونه­ ها، از کیت استخراجPrimePrepTMGenomic DNA Isolation Kit ساخت شرکت GeNet Bio استفاده می ­شود. برای تعیین غلظت DNA استخراج شده، از دستگاه اسپیکتروفتومتر استفاده می­شود.DNA استخراج شده باید در دمای منفی 20 درجه سانتی­گراد نگهداری شود. برای بررسی وضعیت متیلاسیون باید وضعیت متیلاسیون پروموتور ژنRASSF1A را در نمونه ریه موش های سالم و موش ­های دریافت­ کننده دیسولفیرام و موش­ هایی که دارو دریافت نکردند باهم مقایسه کرده تا تاثیر دمتیلاسیون داروها مشخص شود. DNA استخراج شده توسط سدیم بی­سولفات تعدیل می­شود. طی این روش، سیتوزین غیرمتیله به اوراسیل تبدیل می­شود ولی سیتوزین متیله بدون تغییر باقی می­ماند. تعدیل DNA قبل ازانجام PCR ضروری است. برای بررسی وضعیت متیلاسیون ناحیه پروموتور باید هم پرایمر متیله و هم غیرمتیله وجود داشته باشد. برای تایید کار نمونه را PCRکرده و روی ژل آگارز2 درصد برده و با دستگاه ژل­ داکت بررسی می­ کنیم. M1 (RASSF1A)--->GTGTTAACGCGTTGCGTATC(26 M2 (RASSF1A)--->AACCCCGCGAACTAAAAACGA(26 U1 (RASSF1A)--->TTTGGTTGGAGTGTGTTAATGTG(26 U2 (RASSF1A)--->CAAACCCCACAAACTAAAAACAA(26 تکنیک : Real time این روش جهت بررسی میزان تغییرات بیان ژن RASSF1Aدر ریه رت های نژاد ویستار به وزن 230_+20 گرم، بعد تیمار با داروی دیسولفیرام مورد استفاده قرار خواهد گرفت. استخراج RNA تا حد امکان در شرایط استریل عاری از آنزیم RNase در زیر هود با استفاده از دستکش و ماسک انجام خواهد شد، به این تر تیب که میکروتیوبها و سر سمپلرها از نوع free Rnase انتخاب شده و قبل از پروسه استخراج RNA به مدت 15 دقیقه اشعه UV هود روشن و سپس با استفاده از پنبه آغشته به کلروفورم عاری از آنزیم RNase خواهد شد. استخراج RNA طبق پروتوکل کیت total RNA extraction mini kit YT9065 شرکت یکتا تجهیز آزما انجام خواهد شد. تعیین کیفیت و کمیت RNA استخراج شده توسط دستگاه اسپکتروفتومتری انجام خواهد شد؛ میزان جذب نور((ODدر طول موج 260 نانومتر بیانگر میزان غلظت RNA می باشد که با واحد μg/ml نشان داده می شود. همچنین نسبت میزان جذب نور در طول موج 280/260 نانومتر نشان دهنده کیفیت RNA استخراج شده خواهد بود. در ادامه مرحله قبل، با توجه به میزانOD بدست آمده، RNA به میزان لازم در داخل میکرو تیوپ 0.2 RNase free ریخته شده و حجم کلی نمونه با اضافه آب فاقد RNase به حجم 11 میکرولیتر رسیده و مراحل طبق پروتکل کیت ساخت cDNA انجام خواهد شد. تهیه CDNA : تهیه CDNA طبق پروتکل کیت CDNA synthesis kit YT14500 از شرکت یکتا تجهیز آزما انجام می شود. مرحله Real time RT PCR اندازه گیری میزان بیان ژن های مورد نظر با استفاده از پرایمر ACTβ به عنوان Endogenous control و پرایمر RASSF1A با استفاده از کیت SYBR green q PCR master mix 2×1ml YT2551 شرکت یکتا تجهیز آزما با روش Ct) ΔΔComparative Ct ( انجام شد. برنامه Real time PCR شامل مراحل زیر است : 1)first denaturation در دمای Cº95 به مدت 10دقیقه. 2) شامل مراحل (Denaturation ، Annealing و Extension) به ترتیب به تعداد 40 سیکل تکرار. 3)مرحله پایانی منحنی ذوب، توسط دستگاه رسم خواهد شد. تمام آزمایشات Real time RT PCR سه بار تکرار خواهدشد و میانگین CT (سیکل آستانه) آنها پس از کامل شدن واکنش توسط دستگاه محاسبه گردیده و میزان بیان ژنها طبق فرمول زیر محاسبه می شود: ΔCT= CT target gene –CT reference gene =ΔCT treated – ΔCT untreated CT ΔΔ میزان بیان نسبی هر ژن برابر با ΔΔ CT-2 در نظر گرفته خواهد شد ]21و20[ . Primer ID Sequences (5' -> 3') Reference *RASSF1A-F TCATCTGGGGCGTCGTG 23و22 *RASSF1A-R CGTTCGTGTCCCGCTCC 23و22 *ACTβ-F GTTGTCGACGACGAGCG 23و22 *ACTβ-R GCACAGAGCCTCGCCTT 23و22 دلایل ضرورت و توجیه انجام کار تعریف مسالهمقدمه و بیان مساله: فیبروز ریوی یک اختلال پیشرونده است که با تکثیر بیش از حد فیبروبلاست و رسوب پروتئین ­های ماتریکس خارج سلولی مانند فیبرونکتین و رشته­ های کلاژن، مشخص می ­شود. در نتیجه، ساختار و عملکرد طبیعی بافت ریه را مختل می­ کند ]1،2[. در واقع این بیماری کشنده، یک بیماری مزمن در بافت بینابینی ریوی است که به علت صدمه به پارانشیم ریه به وسیله فاکتورهای ایجادکننده التهاب و تجمع کلاژن و اجزای ماتریکس خارج سلولی در ناحیه دیواره کیسه­ های هوایی ایجاد می­ شود ]3[. مکانیسم ­های فیبروز ریوی هنوز بطور کامل درک نشده است و درمان موثر یا رضایت­­­ بخشی برای فیبروز ریه وجود ندارد. فیبروز ریوی یک بیماری کشنده و برگشت­ ناپذیر است که طی یک روند التهابی مزمن، به بافت ریه آسیب می ­رساند و روند فیبروزه شدن ریه را به گونه ­ای تنظیم می­ کند که در نهایت منجر به ایجاد اسکار فیبروزه پیشرونده می­ شود ]4[. در این پژوهش، از بلئومایسین برای ایجاد فیبروز ریوی استفاده می­ شود. بلئومایسین یک داروی شیمی ­درمانی است که برای درمان طیف وسیعی از سرطان­ های انسانی موثر می ­باشد. این دارو، حداقل اثر سمی را بر بافت­های خون­ساز سیستم ایمنی دارد ومی ­تواند بطور گسترده ­ای همراه با سایر عوامل شیمی­­ درمانی بکار رود، ولی متاسفانه به دلیل بروز عارضه فیبروز ریوی،کاربرد این دارو از نظر بالینی بسیار محدود شده است. از آنجا که فیبروز ریوی ناشی از بلئومایسین به راحتی در گونه­ های مختلف پستانداران ایجاد می­ شود، از مکانیسم ­های تجربی با استفاده از این دارو به منظور شناخت دقیق مکانیسم رخداد فیبروز و راه­های درمان آن استفاده می­ شود ]5[. مکانیسم­ های گوناگونی برای فیبروز ریه پیشنهاد شده ­اند که از جمله می­ توان به موارد زیر اشاره کرد: 1) ایجاد آپوپتوز در سلول ­های اپی­تلیال آلوئولی و برونشیولی به عنوان یک واقعه آغازگر فرآیند فیبروز. 2) ایجاد التهاب و ارتشاح سلول­های التهابی. 3) دخالت کموکین ­ها و سیتوکین ­های پیش­ التهابی مانند فاکتور رشد مبدل بتا (TGF-β). 4) افزایش تولید و تجمع ماتریکس خارج سلولی به ویژه کلاژن توسط فیبروبلاست­ها. 5) بیان بیش از حد مهارکننده ­های متالوپروتئینازها که از تجزیه کلاژن جلوگیری می کنند(زیرا متالوپروتئینازها خود باعث تجزیه کلاژن می شوند) 6) فعال شدن و تکثیر زیاد فیبروبلاست­ها ناشی از تغییرات اپی ­ژنتیک. از طرفی، به هر پدیده ­ای که بدون تغییر در توالی DNA موجب تفاوت در فنوتیپ یا بیان ژن می­شود، تغییرات اپی­ ژنتیکی می­ گویند]6[. تغییرات اپی­ ژنتیکی را می­توان تغییرات پایدار در بیان ژن­ها بدون تغییر توالی بازها دانست که طی تقسیمات بعدی سلول، به سلول­های دختری به ارث می­ رسند و اغلب برگشت­ پذیرند]7،8[. امروزه یکی از علل مهم مرگ و میر فیبروزه شدن ارگان­ها می ­باشد بگونه ای که گفته می ­شود فیبروز علت مرگ­ های زیادی را به خود اختصاص می ­دهد ]1،9[. پژوهش ­های اخیر نشان می ­دهد که تغییرات اپی ­ژنتیکی مانند متیلاسیون DNA اثرات قابل­­ توجهی روی تکثیر بیش از حد فیبروبلاست­ها و ایجاد اسکار فیبروزی در بافت ریه دارند ]10[. تغیرات اپی ­ژنتیکی نقش مهمی در غیرفعال کردن ژن­ ها از جمله ژن­های مهارکننده توموری (مانند RASSF1A) دارند ]12و11[. در مطالعات اخیر ارتباط معکوسی بین ژن RASSF1A و فاکتور رشد TGF-β نشان داده شد، بطوریکه در غیاب عملکرد ژن RASSF1A، فعال شدن سیگنال­های TGF-β به میزان زیادی مشاهده می­ شود و با ادامه روند صعودی سیگنال فیزیولوژیکی TGF-β، میزان RASSF1A از طریق مسیر یوبیکویتین-پروتئازوم کم و کمتر می شود.[16] از طرفی در حدود پنجاه سال است که داروی Disulfiram که یکی از اعضای خانواده ی دی تیوکاربامات است به خاطر اثر مهاری بر آنزیم آلدئید دهیدروژناز به عنوان داروی کمکی در درمان معتادان به الکل استفاده شده است,در دهه های اخیر نیز مطالعات گسترده ای در زمینه ی اثر ضدسرطانی و اپی ژنتیک این دارو صورت گرفته است ]12و13و14 [. از آنجایی که در فیبروز ریوی نیز تغییرات اپی ژنتیکی صورت می گیرد، پس پیشنهاد می شود که داروی دیسولفیرام بتواند به عنوان دارویی برای جلوگیری از پیشروی روند فیبروز ریوی مورد استفاده قرار گیرد. پس می­ توان نتیجه گرفت هنگامی­که ژن مهارکننده توموری RASSF1A غیرفعال می­شود، می­تواند با فعال کردن سیگنال­ های TGF-β در پیشرفت روند فیبروزی شدن موثر باشد ]16[. همچنین مطالعات نشان دادند که در بیماری پمفیگوئید غشای مخاطی چشمی، خانواده آلدهید دهیدروژناز1 اثر افزایشی بر روی فیبروبلاست های بافت همبند ایجاد می کنند. این بیماری که در آن اسکار مخاطی ایجاد می شود، می تواند منجر به کوری شود که برای آن درمان آنتی فیبروتیک وجود ندارد. دیسولفیرام می تواند با مهار آلدهید دهیدروژناز فیبروبلاست ها را در محیط in vitro در حد نرمال کنترل کند و به عنوان یک عامل درمانی بالقوه، برای جلوگیری از پیشروی روند فیبروز مطرح شود ]4[. هدف این پژوهش، بررسی هیستوپاتولوژیکی و اپی ژنتیکی اثر حفاظتی داروی دیسولفیرام بر جلوگیری از فیبروز ریوی ناشی از مصرف بلئومایسین در موش های صحرایی است. فهرست منابع و مراجع علمی داخلی فهرست منابع و مراجع علمی خارجیمنابع و ماخذ: # عنوان منبع و ماخذ 1 1 Neary R, Watson CJ, Baugh JA. Epigenetics and the overhealing wound : the role of DNA methylation in fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair [Internet]. Fibrogenesis & Tissue Repair; 2015;1–13. Available from: http://dx.doi.org/10.1186/s13069-015-0035-8 2 2 W Liu, Wan J, Han J, Li C, Feng D, Yue S, et al. Antiflammin-1 attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Respir Res [Internet]. Respiratory Research; 2013;14(1):1. Available from: Respiratory Research 3 3 Ebrahimi E,Javadi E,Rashidi M.protective effects of hydroalcoholic extract of hypericum in the Bleoycin-induced of pulmonary fibrosis in rats.J babol univ med sci,18(1);jan201 PP:44-516 4 4 Sarah D. Ahadome,1 David J. Abraham. Aldehyde dehydrogenase inhibition blocks mucosal fibrosis in human and mouse ocular scarring.JCI insight. August 4, 2016. 5 Selman M,king TE,pardo A. Idiopathic Pulmonary Fibrosis : Prevailing and Evolving Hypotheses about Its Pathogenesis and Implications for Therapy.Ann Intern Med. 2001 Jan 16;134(2):136-51. PMID: 11177318 6 6 Agathanggelou A, Cooper WN, Latif F. Role of the Ras-association domain family 1 tumor suppressor gene in human cancers. Cancer Res. United States; 2005 May;65(9):3497–508. 7 7 noroozi nia izadi. Epigenetic application in the breast cancer. Genet third million. 2010;(Epigenetic application in the breast cancer). 8 8 kioulafa M kaklamanis. prognostic significance of RASSF1A promoter methylation in operable breast cancer. Clin Biochem. 2009; 9 9 Wynn TA. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. J Pathol 2008;214(2):199–210. doi:10.1002/Path.2277 10 10 Gabbiani G. The myofibroblast in wound healing and fibrocontractive.diseases. J Pathol. 2003;200(4):500–3. doi:10.1002/path.1427 11 11 Robinson CM, Neary R, Levendale A, Watson CJ, Baugh JA. Hypoxia-induced DNA hypermethylation in human pulmonary fibroblasts is associated with Thy-1 promoter methylation and the development of a pro-fibrotic phenotype. 2012;1–9. 12 12 Dastjerdi MN, Babazadeh Z, Rabbani M, Gharagozloo M, Esmaeili A, Narimani M. Effects of disulfiram on apoptosis in PANC-1 human pancreatic cancer cell line. Res Pharm Sci. Iran; 2014;9(4):287–94. 13 13 Dastjerdi MN, Babazadeh Z, Salehi M, Hashemibeni B, Kazemi M. Comparison of the anti-cancer effect of Disulfiram and 5-Aza-CdR on pancreatic cancer cell line PANC-1. Adv Biomed Res. India; 2014;3:156. 14 14 Barth KS, Malcolm RJ. Disulfiram: an old therapeutic with new applications. CNS Neurol Disord Drug Targets. United Arab Emirates; 2010 Mar;9(1):5–12. 15 Chai Wenshu ,Li YOngchun , Liu Yvling , Bao Cuifen . Morphologic study of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica [01 Jan 2003, 11(2):76-80] 16 Pefani DE,et al. TGF β Targets the Hippo Pathway Scaffold RASSF1A to Facilitate YAP/SMAD2 nuclear translocation.2016 July 7.Mol cell. 17 17 Cisneros J, Hagood J, Checa M, Ortiz-quintero B, Negreros M, Herrera I, et al. Hypermethylation-mediated silencing of p14 ARF in fibroblasts from idiopathic pulmonary fibrosis. 2012;295–303. 18 صفاییان لیلا*, جعفریان دهکردی عباس, افشارمقدم نوشین, سرهرودی شادی.اثر سیلیمارین بر فیبروز ریوی ناشی از بلئومایسین در موش. مجله دانشگاه علوم پزشکی قم : تابستان 1388,دوره3. 19 19 Mann J, Oakley F, Akiboye F, Elsharkawy A, Thorne AW, Mann DA. Regulation of myofibroblast transdifferentiation by DNA methylation and MeCP2 : implications for wound healing and fibrogenesis. 2007;275–85. 20 20 Wang T, Liu H, Chen Y, Liu W, Yu J, Wu G. Methylation associated inactivation of RASSF1A and its synergistic effect with activated K-Ras in nasopharyngeal carcinoma. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 2009;28(1):1-11. 21 21 Dammann R, Schagdarsurengin U, Liu L, Otto N, Gimm O, Dralle H, et al. Frequent RASSF1A promoter hypermethylation and K-ras mutations in pancreatic carcinoma. Oncogene. 2003;22(24):3806-12. 22 22 Lin J, Haffner MC, Zhang Y, Lee BH, Brennen WN, Britton J, et al. Disulfiram is a DNA demethylating agent and inhibits prostate cancer cell growth. Prostate 2011;71:333-43. 23 23 Avramouli A, Tsochas S, Mandala E, Katodritou E, Ioannou M, Ritis K, et al. Methylation status of RASSF1A in patients with chronic myeloid leukemia. Leuk Res 2009;33:1130-2 24 Selevich MI, Karaedova LM, Ostrovskiĭ IuM. The effect of disulfiram on lipid metabolism in the rat liver. Farmakol Toksikol. 1989 Nov-Dec;52(6):69-72. 25 Karamanakos PN1, Pappas P, Stephanou P, Marselos M. Differentiation of disulfiram effects on central catecholamines and hepatic ethanol metabolism. Pharmacol Toxicol. 2001 Feb;88(2):106-10. 26 Jason P Schroeder,1,6 Debra A Cooper,1,6 Jesse R Schank, Disulfiram Attenuates Drug-Primed Reinstatement of Cocaine Seeking via Inhibition of Dopamine β-Hydroxylase. Neuropsychopharmacology. 2010 Nov; 35(12): 2440–2449. 27 Daniel F. Manvich, Lauren M. DePoy, and David Weinshenker. Dopamine β-Hydroxylase Inhibitors Enhance the Discriminative Stimulus Effects of Cocaine in Rats. J Pharmacol Exp Ther. 2013 Dec; 347(3): 564–573. 28 Udeme Owunari Georgewill, Iyeopu Minakiri Siminialayi, Atuboyedia Wolfe Obianime, Toxicological Evaluation of Disulfiram, Copper Gluconate and Disulfiram/Copper Gluconate Combination on Renal Function in Rodents.2015. خلاصه نتیجه اجرای طرح سابقه علمی طرح و پژوهشهای انجام شده با ذکر مأخذ به ویژه در ایران خلاصه طرح طبق اهداف پیش بینی شده WhatRequirementsAreMet ملاحظات گروه ملاحظات ناظر HomeAddress WorkPlace aAbstract مهمانان جلسه دستور جلسه آینده دستور جلسه چکیده پایان نامه خلاصه

نام فایل	تاریخ درج فایل	اندازه فایل	دانلود
960449.htm	1396/09/29	135244	دانلود